Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中都逐渐扩展

从第一次消失人微内诱发球蛋白到消失1型式癌症临床深入研究副作用的方面率在孩童末期就有很好的所述，多个人微内诱发球蛋白非典型的孩童中会有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的孩童这一存量减低到84%。比起之下，占临床深入研究1型式癌症一半以上的型式1型式癌症的复发机制还很难赢取充分的深入研究。

愈加多的人开始运用于依此系统来度量1型式癌症的方面：形态在消失多种人微内诱发球蛋白时转回第1期中，消失血糖异常时转回第2期中，消失副作用时转回第3期中。一些多发人微内诱发球蛋白非典型的形态，在1期和2期，方面速度快，并发展为复发的1型式癌症。我们以前所述了一分组在首次侦测到多种人微内诱发球蛋白样本后至少10年无癌症的很慢方面者，这分组患儿人数少，但原则上特征非常具体。随后，我们发现人微内诱发球蛋白特异性CD8+T肝细胞质三子化当在方面快速的患儿中会原则上不共存，但在全面性复发和长期共存的癌症患儿中会很容易侦测到。这可能确实，与方面患儿比起，这些患儿诱发质三子化当的恒定增强。

早期深入研究确实，尽管恒定性T肝细胞(Treg)存量正常人，但癌症患儿共存一些机制缺陷，其中会包括对IL-2的质三子化当意志力增大。此外，癌症患儿中会的畸变当CD4+T肝细胞可能对恒定更为重要抵抗性，展现出为畸变当T肝细胞的可抑制减弱，自然产生的Treg和游离产生的可借Treg，以及免疫球蛋白经历的CD4+T肝细胞中会IL-2质三子化当减弱。本深入研究的目的是所述了CD4+恒定性T肝细胞(Treg)在一小群极快速方面者中会的原则上特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以青年人蓝本的纵向深入研究，在21岁以下确诊的患儿亲属中会检验1型式癌症的危险各种因素。我们以前所述了长期快速方面者的原则上特征，他们依然多重人微内诱发球蛋白非典型大约10年，但很难消失癌症的临床深入研究副作用，慢性或非透过性诱发。随后，10名继续依然无癌症并愿意提供大量尿液样本的快速方面者纳入T和B肝细胞机制系统性。在目前为止的深入研究中会，8名慢方面者(SP分组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人微内诱发球蛋白非典型。所有的组织者都处于1型式癌症方面的1期，尽管一些人随后失去了人微内诱发球蛋白对某些免疫球蛋白的非典型质三子化当，然而，一名患儿已经处于2期至少6年，但很难消失临床深入研究副作用，一名患儿被病人为癌症，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中会对该小分三子透过了单独评核。分离出来外周血单个氢肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞心法和T肝细胞可抑制试验评核小分三子中会Treg的频率、遗传式和机制。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无行政官员聚类系统性，评核Treg遗传式。

结果：与身微健康小分三子比起，来自慢方面微的梦境CD4+T肝细胞的行政官员聚类确实，激来生的梦境CD4+ Treg频率减低，与糖皮质激素可借的TNFR具体蛋白(GITR)理解减低有关。一名HbA1c急剧下降的患儿与方面快速者和匹配的对照分组比起，Treg序有所多种不同。机制系统性确实，与身微健康小分三子比起，来自快速方面微的Treg介导的CD4+畸变当T肝细胞可抑制明显损坏。展现出为对畸变当CD4+T肝细胞CD25和CD134理解的可抑制减低。

所示1 系统地的遗传式系统性确实，CD4+Treg亚型式在慢方面所述符中会减低。由FlowSOM降解的Treg四楼，聚集在来自所有小分三子的来生CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标识物理解鉴定出10个元簇:梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)运用于9个多种不同Treg标识降解的10个元簇的MST。每个路由器象征性一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在路由器分组周围打磨。每个路由器中会的煎饼所示坚称单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热所示，以确实整微标识理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)降解所示，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster装入线所示(重元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肝细胞(l)。橘色红色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配大写字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模型式证实，Treg频率的减低是方面快速的标志。分级门控(a - f)和果树系统性(g-k)比较SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l形态的象征性性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR理解透过分离出来，模拟FlowSOM形态。(b) HD(黑点)和SP(布氏)分组以及小分三子SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的频率汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的装入线所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被辨识为SP和HD所述符之间的多种不同。(j)装入线所示确实了在SP(布氏)和HD(灰点)分组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(存量)。(k)直方所示确实每个簇的遗传式(深蓝色)和Treg标识相对来说理解与历史背景理解(紫色);上列，文件系统Treg_3;上面一行，文件系统Treg_4。历史背景与所有其他簇中会标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配大写字母秩检验

所示3 与身微健康献血者比起，方面快速者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T肝细胞元簇(梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个理解标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)所述符的理解热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解结合，确实直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon匹配大写字母秩和检验，p< 0.07(橘色)所有小分三子包括，p< 0.05(紫色)小分三子SP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)结合，确实直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配大写字母秩检验

所示4 来自快速方面的CD4+ treg肝细胞控制畸变当CD4+T肝细胞的意志力增大。SP分组用紫色的线和红色坚称，HD分组用黄色的线和红色坚称，橘色的线/红色坚称小分三子sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被标识为CFSE, Treg按观察的存量反应物。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3同月透过流式肝细胞心法侦测。(a-d)与CD4+应当答者相对来说应当的treg指导(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。运用于非典型对照(激来生的自发当肝细胞不含treg)计算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变当CD4+T肝细胞对快速方面的T肝细胞还原的可抑制更寻常。SP分组用紫色的线和红色坚称，HD分组用黄色的线和红色坚称，橘色的线/红色坚称小分三子sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标识，treg按观察的存量反应物。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3同月透过流式肝细胞心法(CD25反染)和肝细胞因三子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE可抑制百分比(b)。(c,d) CD25可抑制百分比(c)和CD134可抑制百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速方面三子的还原梦境CD4+Treg在GITR理解中会赢取了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1型式癌症风险形态中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28