Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显现出胰脏自身特异性到显现显现出1型式冠心病医学副作用的困难重重率在学童之中期就有极佳的详细描述，多个胰脏自身特异性HIV的学童之中有70%在血清转换后10周内入院冠心病，而随访15年的学童这一比例减小到84%。比起于之下，占医学1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的得病系统还没有人受益适当的研究课题。

越来越多的人开始运用于有系统系统来定义1型式冠心病的困难重重：幼体在显现显现出多种胰脏自身特异性时进到第1阶段性，显现显现出血糖异常时进到第2阶段性，显现显现出副作用时进到第3阶段性。一些多发胰脏自身特异性HIV的幼体，在1期和2期，困难重重较极快，并发展为得病的1型式冠心病。我们之前详细描述了一小组在首次验证到多种胰脏自身特异性样品后至多于10年无冠心病的较快困难重重者，这小组病人总人数多于，但基本特征非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T新线粒体反不宜在困难重重较极快的病人之中基本不存在，但在近期得病和长时间存在的冠心病病人之中很容易验证到。这显然确实，与困难重重病人比起于，这些病人自身免疫反不宜的调节增强。

早期研究课题确实，尽管调节性T新线粒体(Treg)数量但会，但冠心病病人存在一些系统局限性，其之中除此以外对IL-2的反不宜战斗能力降低。此外，冠心病病人之中的效不宜CD4+T新线粒体显然对调节来得具抵抗性，表现为效不宜T新线粒体的正向减弱，自然显现出的Treg和体外显现出的正向Treg，以及抗体个人经历的CD4+T新线粒体之中IL-2反不宜减弱。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T新线粒体(Treg)在一小群极较极快困难重重者之中的基本特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁请注意胃癌的病人配偶之中检查1型式冠心病的可怕因素。我们之前详细描述了长时间较极快困难重重者的基本特征，他们保持多重胰脏自身特异性HIV至多于10年，但没有人显现显现出冠心病的医学副作用，极快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量血液样品的较极快困难重重者归入T和B新线粒体系统深入研究课题。在现今的研究课题之中，8名极快困难重重者(SP小组)，之中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身特异性HIV。所有的旁观者都所处1型式冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身特异性对某些抗体的HIV反不宜，然而，一名病人已经所处2期至多于6年，但没有人显现显现出医学副作用，一名病人被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集检验样品时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究课题之中对该丝氨酸顺利完成了单独审计。分离外周血单个核新线粒体(PBMCs)，采用多参数流式新线粒体练成和T新线粒体正向试验审计丝氨酸之中Treg的频率、遗传基因式和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)顺利完成无都由聚类深入研究课题，审计Treg遗传基因式。

结果：与肥胖症丝氨酸比起于，来自极快困难重重体的清醒CD4+T新线粒体的都由聚类揭示，激活的清醒CD4+ Treg频率减小，与抑制作用正向的TNFR关的蛋白(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升温的病人与困难重重较极快者和比如说的对照小组比起于，Treg谱有所不同。系统深入研究课题确实，与肥胖症丝氨酸比起于，来自较极快困难重重体的Treg介导的CD4+效不宜T新线粒体正向比起来说损伤。表现为对效不宜CD4+T新线粒体CD25和CD134解读的正向减小。

图1 深入的遗传基因式深入研究课题揭示，CD4+Treg亚型式在极快困难重重数据流之中减小。由FlowSOM生成的Treg会议室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -新线粒体上。根据上面物解读确认显现出10个元簇:清醒T新线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T新线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T新线粒体;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个一个大(100个一个大)，相当大的元一个大(10个元一个大)在链表小组周围上色。每个链表之中的饼图暗示单个上面的解读高级别。(b)每个元聚类的热图，以揭示整体上面解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成图，以及FlowSOM标记的每个元簇的表层。(e-l)比起核素为每个metacluster罐新示意图(核素> 0.05%)确认为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T新线粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T新线粒体(l)。黄色白点均是由捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 运用于CITRUS的预测模型式证明，Treg频率的减小是困难重重较极快的徽章。分级制度门控(a - f)和葡萄深入研究课题(g-k)比较SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T新线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的均是由性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及丝氨酸SP 606(黄色)之中CD25+ cd127的频率综合图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三子集的罐新示意图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突显现出的簇被标记为SP和HD数据流之间的不同。(j)罐新示意图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起核素(比例)。(k)数据集揭示每个簇的遗传基因式(粉红色)和Treg上面比起解读与着重解读(紫色);上列，内核Treg_3;后面一行，内核Treg_4。着重与所有其他簇之中上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

图3 与肥胖症献血者比起于，困难重重较极快者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T新线粒体元簇(清醒T新线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T新线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T新线粒体;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个解读上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的解读热图(sp606不除此以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR解读接在，揭示数据集(c)和综合图(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸除此以外，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和比如说的HD不除此以外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)接在，揭示数据集(e)和综合图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

图4 来自较极快困难重重的CD4+ treg新线粒体控制效不宜CD4+T新线粒体的战斗能力降低。SP小组用紫色的新线和白点暗示，HD小组用红色的新线和白点暗示，黄色的新线/白点暗示丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被上面为CFSE, Treg按通过观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置新线粒体，培养3同一天顺利完成流式新线粒体练成验证。(a-d)与CD4+不宜答者比起不宜的treg培养(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE正向比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向比率。运用于HIV对照(激活的响不宜新线粒体则有treg)计算正向比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

图5 效不宜CD4+T新线粒体对较极快困难重重的T新线粒体重置的正向来得极端。SP小组用紫色的新线和白点暗示，HD小组用红色的新线和白点暗示，黄色的新线/白点暗示丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒体顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel上面，treg按通过观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置新线粒体，培养3同一天顺利完成流式新线粒体练成(CD25反染)和新线粒体因三子深入研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE正向花红(b)。(c,d) CD25正向花红(c)和CD134正向花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显现出的结论是，来自较极快困难重重三子的重置清醒CD4+Treg在GITR解读之中受益了扩展和丰沛，强调了进一步研究课题Treg在1型式冠心病风险幼体之中的异质性的必要。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28